Dithiothreitol (DTT) wakili ne na rage yawan amfani da shi, wanda kuma aka sani da sabon ƙarar kore.Yana da ƙaramin mahaɗan kwayoyin halitta tare da ƙungiyoyin mercaptan guda biyu (-SH).Saboda rage kaddarorin sa da kwanciyar hankali, ana amfani da DTT sosai a cikin gwaje-gwajen ilimin halitta da na kwayoyin halitta.
Babban aikin DTT shine rage haɗin disulfide a cikin sunadarai da sauran kwayoyin halitta.Dangantakar disulfide wani muhimmin bangare ne na nada furotin da kwanciyar hankali, amma a karkashin wasu yanayi na gwaji, irin su binciken SDS-PAGE mai raguwa, sake hadewar furotin da nadawa, wajibi ne a rage haɗin disulfide zuwa ƙungiyoyin thiol guda biyu don buɗe tsarin sararin samaniya. furotin.DTT na iya amsawa tare da haɗin disulfide don rage su zuwa ƙungiyoyin mercaptan, don haka buɗe tsarin sararin samaniya na furotin kuma yana sauƙaƙa bincike da sarrafa shi.
Hakanan ana iya amfani da DTT don kare aikin enzyme da kwanciyar hankali.A wasu halayen enzyme-catalyzed, aikin enzyme na iya ragewa ta oxidant.DTT na iya amsawa tare da oxidants don rage su zuwa abubuwa marasa lahani, don haka kare aiki da kwanciyar hankali na enzyme.
Idan aka kwatanta da magungunan rage al'ada irin su β-mercaptoethanol (β-ME), ana ɗaukar DTT a matsayin wakili mai aminci da kwanciyar hankali.Ba wai kawai tsayayye ne a cikin bayani mai ruwa ba, amma kuma yana kula da rage kaddarorinsa a ƙarƙashin yanayin zafi mai zafi da yanayin tushen acid.
Amfani da DTT yana da sauƙi.Gabaɗaya, an narkar da DTT a cikin madaidaicin buffer sannan kuma an ƙara shi zuwa tsarin gwaji.Ana buƙatar ƙaddara mafi kyawun maida hankali na DTT bisa ga takamaiman gwaji, kuma ana amfani dashi gabaɗaya a cikin kewayon 0.1-1mM.Ƙananan ƙididdiga na iya rage mummunan tasiri akan ci gaban sel kuma zai iya rage cytotoxicity saboda wuce gona da iri na sunadaran da ake nufi.Maɗaukaki mafi girma zai iya haifar da nauyin ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar ƙwayar cuta da kuma tasiri mai tasiri akan ingancin magana.
Hanyar da za a iya ƙayyade mafi kyawun maida hankali na iya zama don kimanta matakin furci na furotin da aka yi niyya ta hanyar gudanar da gwaje-gwajen shigar da IPTG a wurare daban-daban.Za a iya yin gwaje-gwajen ƙananan al'adu ta hanyar amfani da kewayon IPTG (misali 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, da dai sauransu) kuma za a iya kimanta tasirin magana a wurare daban-daban ta hanyar gano matakin bayyanar furotin da aka yi niyya (misali Western Western). toshe ko gano haske).Bisa ga sakamakon gwajin, an zaɓi ƙaddamarwa tare da mafi kyawun sakamako na magana a matsayin mafi kyawun maida hankali.
Bugu da kari, zaku iya komawa zuwa wallafe-wallafen da suka dace ko ƙwarewar wasu dakunan gwaje-gwaje don fahimtar kewayon tattarawar IPTG da aka saba amfani da su a ƙarƙashin yanayin gwaji iri ɗaya, sannan haɓakawa da daidaitawa gwargwadon buƙatun gwaji.
Yana da mahimmanci a lura cewa mafi kyawun maida hankali na iya bambanta dangane da tsarin maganganu daban-daban, sunadaran sunadaran manufa, da yanayin gwaji, don haka ya fi dacewa don ingantawa akan kowane hali.
A taƙaice, DTT wakili ne na rage yawan amfani da za a iya amfani da shi don rage haɗin disulfide a cikin sunadarai da sauran kwayoyin halitta da kuma kare ayyukan enzyme da kwanciyar hankali.An yi amfani da shi sosai a cikin gwaje-gwajen ilimin halitta da na kwayoyin halitta.
Lokacin aikawa: Satumba-28-2023